PCR實驗室建設所需資料

標(biao)本(ben)制備區

該(gai)區(qu)域主要(yao)進(jin)行的操作(zuo)為臨(lin)床標本的保存(cun)(cun)、核酸(suan)(RNA、DNA)提取、貯存(cun)(cun)及其加入至擴增反應管(guan)和測定RNA時cDNA的合成(cheng)。

標本制備區配備有2~8°C冰箱和-20°C冰箱，計算冷負荷時，需要將它們計算在內。在標本制備區，還需要配備生物安全柜，用于進行提取核酸的操作。

為避(bi)免提取的(de)核酸在柜(ju)內反復循環，造成標本之間的(de)交叉(cha)污染，出現假陽性結果，該區(qu)域配備的(de)生物安全柜(ju)是(shi)B2型的(de)。生物安全柜(ju)工作區(qu)垂直(zhi)氣流來自實驗(yan)室(shi)，排風經過(guo)過(guo)濾器過(guo)濾后直(zhi)接排至室(shi)外(wai)，不(bu)允許回(hui)到(dao)安全柜(ju)和實驗(yan)室(shi)中。

根據(ju)經驗(yan)，如果實驗(yan)室(shi)內(nei)配(pei)備生(sheng)物(wu)安全柜，每配(pei)備一臺，實驗(yan)室(shi)的面積增加10m2;標(biao)本制備區的面積宜在25m2~30m2之間。本區的壓力梯(ti)度(du)要求為:相對于(yu)鄰(lin)近區域為正(zheng)壓，以避(bi)免從鄰(lin)近區進(jin)入本區的氣(qi)溶(rong)膠污染。

擴(kuo)增室

該區域主要進行的(de)操作為DNA或cDNA擴(kuo)增。此外，已制備(bei)的(de)DNA模(mo)板和(he)合(he)成的(de)cDNA(來(lai)自(zi)樣(yang)本制備(bei)區)的(de)加入和(he)主反(fan)應(ying)混(hun)(hun)合(he)液(ye)(來(lai)自(zi)試劑(ji)貯存和(he)制備(bei)區)制備(bei)成反(fan)應(ying)混(hun)(hun)合(he)液(ye)等也可在本區內進行。

在巢(chao)式(shi)PCR測定(ding)中(zhong)，通常(chang)在一輪擴增后打(da)開反應管(guan)，因此(ci)巢(chao)式(shi)擴增有較高的污染(ran)危險性，二次加樣在本區(qu)內進行。

擴增室主要(yao)配備(bei)PCR實驗室的儀器(qi)PCR儀，本文實例中使用了ABI7500和ABI9700兩種PCR儀。

在實驗室建造過程中，需要(yao)給PCR儀配備專門的UPS電源，以保障其正常工作。該區(qu)面(mian)積控制(zhi)在15m2~20m2。

本(ben)區(qu)的(de)壓(ya)力梯度要求為(wei):相對于鄰近區(qu)域(yu)為(wei)負壓(ya)，以(yi)避(bi)免氣溶膠(jiao)從(cong)本(ben)區(qu)漏出。為(wei)避(bi)免氣溶膠(jiao)所致的(de)污染，應盡量減(jian)少在(zai)(zai)本(ben)區(qu)內的(de)不必要的(de)走動。個(ge)別操作如加樣等應在(zai)(zai)超凈(jing)臺內進(jin)行。建(jian)議采用5~10Pa壓(ya)差(cha)，在(zai)(zai)控制(zhi)上比較容易(yi)實現。

產物分(fen)析(xi)區

該區域主(zhu)要(yao)進行(xing)的(de)操(cao)作為擴增片(pian)段的(de)測定。如使用全(quan)自動封閉分析儀器(qi)檢測，此區域可不設。

在(zai)室(shi)內(nei)配備(bei)通風櫥(chu)，保障房(fang)間內(nei)的(de)相對負壓(ya)，空氣從室(shi)外流向室(shi)內(nei)。該區面積控(kong)制在(zai)15m2~20m2。

本(ben)區(qu)是主要(yao)的(de)擴增(zeng)產(chan)物(wu)污染來源，因此對本(ben)區(qu)的(de)壓(ya)力梯度的(de)要(yao)求為:相對于鄰(lin)近(jin)區(qu)域為負壓(ya)，以(yi)避免擴增(zeng)產(chan)物(wu)從本(ben)區(qu)擴散至其它區(qu)域。建議采用5~10Pa壓(ya)差，在控(kong)制(zhi)上比較容易實現。

03

正負(fu)壓(ya)區域緩(huan)沖室的設置

根(gen)據(ju)壓(ya)(ya)力梯(ti)度的(de)要求(qiu)，試劑配制室和樣(yang)品處理室為相(xiang)對正(zheng)壓(ya)(ya)，擴增室和產物(wu)分析室為相(xiang)對負壓(ya)(ya)，要求(qiu)正(zheng)壓(ya)(ya)的(de)區域和要求(qiu)負壓(ya)(ya)的(de)區域的(de)緩(huan)沖室內的(de)壓(ya)(ya)力設(she)計大不相(xiang)同。

正(zheng)壓(ya)緩沖室符合一般正(zheng)壓(ya)潔(jie)凈(jing)室的緩沖原(yuan)則(ze)，主要是防止室外環境(jing)空氣中的氣溶膠進入室內。

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