貴州潔凈裝修告訴你實驗(yan)室如何(he)檢測(ce)及解決PCR污染的方法

你的(de)實驗(yan)結果受到污(wu)染的(de)影(ying)響了嗎？

生(sheng)物實(shi)驗(yan)，大多數(shu)實(shi)驗(yan)檢測都是微觀的(de)，基于細胞，分子(zi)，蛋白水平，而這些微觀樣本對外(wai)界環境的(de)影響(xiang)(xiang)敏感，比如溫度、ph值(zhi)、酶解、損(sun)傷等，在我們盡力呵(he)護樣本的(de)生(sheng)存環境的(de)同(tong)時，污(wu)(wu)染也是需要(yao)注意的(de)頭(tou)等大事，要(yao)堅決避免環境中的(de)“雜質”的(de)亂入，包括樣本污(wu)(wu)染，試劑儀(yi)器(qi)交叉污(wu)(wu)染、產物氣溶膠污(wu)(wu)染等對實(shi)驗(yan)結果的(de)影響(xiang)(xiang)。“易查不易察(cha)”，污(wu)(wu)染來的(de)悄無聲息(xi)，防(fang)不勝防(fang)，假陽性結果讓(rang)無數(shu)生(sheng)物學(xue)子(zi)抓狂(kuang)和崩潰。

在(zai)眾多的(de)(de)生(sheng)物(wu)(wu)實驗室(shi)，分子生(sheng)物(wu)(wu)學檢測(ce)方法如PCR因其(qi)高(gao)靈敏度(du)、快(kuai)速、操作(zuo)方便(bian)等優勢已經被(bei)廣泛應(ying)用，不(bu)過正(zheng)是由于它靈敏度(du)極(ji)高(gao)，極(ji)微(wei)量的(de)(de)污(wu)染源(yuan)都(dou)(dou)有可(ke)能導致檢測(ce)結果的(de)(de)假陽性，所以對環境污(wu)染的(de)(de)控制也極(ji)為(wei)嚴(yan)格。面對眾多的(de)(de)污(wu)染源(yuan)，比(bi)如樣(yang)(yang)本交叉(cha)污(wu)染、試劑儀器交叉(cha)污(wu)染、克隆質粒污(wu)染、PCR擴增產物(wu)(wu)污(wu)染、還有極(ji)容易(yi)忽(hu)視的(de)(de)氣溶(rong)(rong)膠(jiao)污(wu)染，氣溶(rong)(rong)膠(jiao)是由固(gu)體(ti)或液體(ti)小質點(dian)分散并懸(xuan)浮在(zai)氣體(ti)介(jie)質中形(xing)成(cheng)的(de)(de)膠(jiao)體(ti)分散體(ti)系，在(zai)空氣與液體(ti)面摩擦時，比(bi)如在(zai)操作(zuo)時比(bi)較劇烈地搖動反應(ying)管(guan)，開蓋時、吸(xi)樣(yang)(yang)時及污(wu)染進樣(yang)(yang)槍(qiang)的(de)(de)反復吸(xi)樣(yang)(yang)都(dou)(dou)可(ke)形(xing)成(cheng)氣溶(rong)(rong)膠(jiao)而污(wu)染。據計(ji)算一個(ge)氣溶(rong)(rong)膠(jiao)顆(ke)粒可(ke)含48000拷貝(bei)，因而由其(qi)造成(cheng)的(de)(de)污(wu)染是一個(ge)非(fei)常重要(yao)而被(bei)忽(hu)視的(de)(de)污(wu)染源(yuan)。

雖然(ran)這(zhe)些(xie)污(wu)染(ran)(ran)對(dui)PCR實(shi)驗(yan)結果(guo)的(de)(de)(de)(de)影(ying)響(xiang)已經(jing)受到了廣(guang)(guang)泛重視，多(duo)數實(shi)驗(yan)室(shi)對(dui)污(wu)染(ran)(ran)控制(zhi)都采取了各種(zhong)辦法(fa)，比如定期大掃(sao)除清理(li)、劃(hua)分操(cao)作區(qu)域、試(shi)劑分裝、操(cao)作謹(jin)慎、重復(fu)實(shi)驗(yan)、多(duo)角度驗(yan)證結果(guo)。但(dan)是微量的(de)(de)(de)(de)核酸片段就(jiu)能被擴增，所以對(dui)污(wu)染(ran)(ran)物的(de)(de)(de)(de)控制(zhi)不僅僅是做到這(zhe)些(xie)就(jiu)能夠(gou)杜絕和避免的(de)(de)(de)(de)，關(guan)鍵是需要(yao)從源(yuan)(yuan)頭控制(zhi)。目(mu)前多(duo)數生物試(shi)驗(yan)室(shi)，分子實(shi)驗(yan)每天都在(zai)大規模進行，污(wu)染(ran)(ran)源(yuan)(yuan)已經(jing)無處不在(zai)，特異(yi)(yi)性的(de)(de)(de)(de)，非特異(yi)(yi)性的(de)(de)(de)(de)，同源(yuan)(yuan)的(de)(de)(de)(de)，非同源(yuan)(yuan)的(de)(de)(de)(de)，廣(guang)(guang)泛分布(bu)在(zai)樣本容(rong)器、實(shi)驗(yan)室(shi)臺面，試(shi)劑溶液中、儀器表面內管附(fu)著等等，你(ni)以為(wei)普通(tong)的(de)(de)(de)(de)清理(li)就(jiu)能解決這(zhe)些(xie)污(wu)染(ran)(ran)源(yuan)(yuan)嗎？必須是不行的(de)(de)(de)(de)，實(shi)驗(yan)室(shi)大拿(na)們都為(wei)了清除這(zhe)些(xie)污(wu)染(ran)(ran)源(yuan)(yuan)研(yan)究出好多(duo)種(zhong)方法(fa)，整(zheng)理(li)跟大家(jia)共享。

01、合理的(de)實驗室分(fen)區(qu)

實驗室內各工作區的實驗用品，包括移液器等應專用。如有可能，應在裝有紫外燈的層流式工作臺（如生物安全柜、超凈工作臺）內，吸加PCR試劑，工作(zuo)臺(tai)內應放(fang)置(zhi)PCR專(zhuan)業用的微(wei)量離心機(ji)、一次性手(shou)套、各(ge)量程的移(yi)液器和其他必須物品。

02、正確的實驗操作(zuo)

吸加PCR試劑和模(mo)板(ban)的操(cao)作(zuo)應嚴格按要(yao)求(qiu)進行，吸樣要(yao)慢(man)，盡(jin)量一次性完(wan)成，忌多次抽吸，以免交叉污染(ran)或產生氣溶膠污染(ran)。

實驗的(de)過(guo)程中(zhong)應(ying)勤換(huan)手套，在進(jin)出不同區(qu)域或進(jin)行模板操作后，都(dou)應(ying)及時更換(huan)手套。貴(gui)州(zhou)潔凈裝(zhuang)修

裝有PCR試(shi)劑的(de)(de)微量離心管(guan)(guan)(guan)在打(da)開之(zhi)前(qian)應先做(zuo)瞬時離心（約10s），將(jiang)管(guan)(guan)(guan)壁及管(guan)(guan)(guan)蓋上的(de)(de)液體甩至(zhi)管(guan)(guan)(guan)底部，從而減少污(wu)染手套或加樣器(qi)的(de)(de)機(ji)會(hui)。開管(guan)(guan)(guan)動作要輕，以防管(guan)(guan)(guan)內液體濺出或形成(cheng)氣溶膠，造成(cheng)污(wu)染。

在同時進行多(duo)個PCR反應時，應制(zhi)備主反應混合(he)液，再分(fen)裝(zhuang)至(zhi)PCR反應管，最(zui)后添(tian)加樣(yang)品核(he)酸模板，以減少單個添(tian)加操(cao)作繁瑣(suo)造成的污染。

03、實(shi)驗器(qi)具和試劑(ji)

實驗室自己配置的試劑，如去(qu)離子(zi)水(shui)、緩沖液等(deng)，在使用之前均應高壓滅菌(jun)或過(guo)濾(lv)除菌(jun)。

分(fen)裝PCR試劑：所有的(de)PCR試劑都應(ying)小量(liang)分(fen)裝，以減少重復取樣(yang)次數，并置于-20℃保存，適(shi)當時，最(zui)好做到專(zhuan)人專(zhuan)用。另外(wai)，PCR試劑、PCR反應(ying)液應(ying)與(yu)樣(yang)品及PCR產物分(fen)開保存，不應(ying)放于同一冰盒或冰箱。

所有吸頭、反應管等(deng)應一次性使(shi)用(yong)，使(shi)用(yong)之前，都應經(jing)過高(gao)壓處(chu)理。若條件允(yun)許(xu)，最好使(shi)用(yong)帶(dai)濾器的槍頭。各工作區內的移液器要(yao)有標識(shi)，應固定使(shi)用(yong)用(yong)途，不能交叉使(shi)用(yong)。

04、實驗設計

實(shi)驗設計方面(mian)應(ying)(ying)遵循實(shi)驗室(shi)內部質量控制的相(xiang)關規定，實(shi)驗中(zhong)至少應(ying)(ying)：

設置(zhi)目(mu)標DNA陽性對照(zhao)反(fan)應。對靶(ba)序列所作的適當的稀釋工作應于實驗(yan)前(qian)在實驗(yan)室(shi)(shi)內別的位置(zhi)進行，這樣可防止將靶(ba)DNA的濃溶液帶到(dao)實驗(yan)室(shi)(shi)中(zhong)專門(men)進行PCR的位置(zhi)。貴州(zhou)潔凈裝(zhuang)修

設(she)置PCR試劑陰性對(dui)照和目標DNA陰性對(dui)照反應。